实验室检测对于确诊疾病的病原至关重要,样品的采集关系到检测的准确性与检测效率,本文旨在介绍各类疾病的样品采集类型及方法。
引起猪呼吸道疾病的主要传染性疾病有猪繁殖与呼吸综合征 (蓝耳病) 、猪流感、猪伪狂犬病、猪巴氏杆菌病 (猪肺疫) 、猪支原体肺炎 (喘气病) 、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病、猪萎缩性鼻炎等。
鼻拭子是常用样品类型,采样方便不用解剖,但检出率与准确性不如肺脏样品。肺脏是呼吸道疾病实验室检测的最佳病料。
也可采集病猪全血样品 (抗凝血采集静脉血或采血后剧烈震荡破坏凝血) 用于实验室病原检测,全血样品并不能全面分析引起呼吸道疾病的所有病原, 仅能检出引起病毒血症与菌血症的病原。
腹泻性疾病主要包括猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒感染、猪瘟、大肠杆菌引起的仔猪黄白痢、仔猪水肿病、沙门氏菌引起的仔猪副伤寒、螺旋体引起的猪痢疾、魏氏梭菌引起仔猪红痢等。
常采集肛拭子、或者腹泻粪便进行检测。也可选用肠内容物 、肠黏膜、肠系膜淋巴结。
病毒性腹泻主要感染肠绒毛上皮细胞, 并在肠绒毛中进行增殖。大量病毒随着肠绒毛破坏脱落等, 释放至肠内容物中, 同时肠上皮细胞破损, 病毒可以进入毛细血管, 引起肠系膜淋巴结等组织病变。因此,可用肠系膜淋巴结、肠黏膜或肠内容物进行实验室病原检测。
细菌性腹泻,主要选用病变部位肠内容物或小肠内容物进行病原菌的分离;腹泻病猪常伴有胃、肠黏膜受损, 病原菌容易进入血液循环引起菌血症, 常选用肝脏进行病原菌的分离
引起猪神经症状的主要疾病包括猪伪狂犬病、流行性乙型脑炎、猪链球菌病、李氏杆菌病、仔猪水肿病、猪丹毒等。
猪伪狂犬病病毒与乙型脑炎病毒主要通过感染病猪脑组织引起神经症状,患猪脑组织是检测神经症状病毒的最佳病料;伪狂犬病病毒还在扁桃体、肺脏等组织中大量存在,乙型脑炎病毒感染还可以选取发热期病猪血液进行病原检测。猪链球菌病、李氏杆菌病、仔猪水肿病等引起神经症状需要病原菌进入血液引起菌血症或毒血症。因此, 主要选取发病动物肝脏、脾脏等进行病原菌分离。
3.猪的皮肤病, 例如渗出性皮炎等可以选取坏死皮肤或皮肤结痂部位进行病原检测;
4.流产症状的传染病, 例如猪细小病毒病、布氏杆菌病等, 则采取流产胎儿和胎衣;
案例:18周左右育肥猪,鼻拭子检测蓝耳抗原阳性,想要测序,测序公司要求样品ct值小于30,采全血送检蓝耳抗原阳性,但ct值大于30,重新采集死猪腹股沟淋巴结,ct值24,符合测序要求。
抗体检测主要用于评价疫苗免疫效果;部分抗体检测例如伪狂犬病gE抗体检测, 可以用以监测猪场伪狂犬病野毒感染情况。抗体检测应采集猪前腔静脉或耳缘静脉血, 采血后容器中应留有一定空隙 (利于血清析出) ,常温或37℃倾斜30~45°角放置30 min至1 h使其凝血, 再4℃放置6~12 h析出血清。抗体检测血样应避免剧烈震荡, 分离血清以前应避免0℃以下冷冻, 剧烈震荡与冷冻将导致红细胞破裂, 溶血会对抗体检测产生一定影响。
代洪波,林艳,周远成,吴江江,朱玲.规模化猪场常见传染病的样品采集方法[J].猪业科学,2012,29(10):32-33.